單克隆抗體制備是針專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創(chuàng)立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。
雜交瘤技術制備單克隆抗是針對體的主要步驟包括：
(1)抗原制備;
(2)**動物;
(3)**脾細胞和骨髓瘤細胞的制備;
(4)細胞融合;
(5)雜交瘤細胞的選擇培養(yǎng);
(6)雜交瘤細胞的篩選;
(7)雜交瘤細胞的克隆化;
(8)單克隆抗體的檢定;
(9)分泌單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立;
(10)單克隆抗體的大量制備。
下面簡要介紹單克隆抗體制備過程：
1、**動物 **動物是用目的抗原**小鼠，使小鼠產生致敏B**細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預先制定的**方案進行**注射。 抗原通過血液循環(huán)或**循環(huán)進入外周**器官，刺激相應B**細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B**細胞。
2、細胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種**細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細胞。
3、選擇性培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，單克隆抗體制備一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的**細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。
4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化 在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細胞，單克隆抗體制備只有少數(shù)是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的**學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經過**鑒定其所分泌單克隆抗體的**球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，及時進行凍存。
5、單克隆抗體的大量制備 單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內誘生法和體外培養(yǎng)法。
豬末端補體復合體C5b-9(C5b-9)ELISA試劑盒 porcine Terminal Complement Complex C5b-9 (C5b-9) ELISA Kit 0.781-50ng/mL 0.32ng/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬**球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒 porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit 1.23-100ug/mL 0.53ug/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬**球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒 porcine Immunoglobulin E (IgE) ELISA Kit 0.156-10ng/mL 0.066ng/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬**球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒 porcine Immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit 31.25-2000pg/mL 13.2pg/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬類胰蛋白酶(TPS)ELISA試劑盒 porcine Tryptase (TPS) ELISA Kit 0.313-20ng/mL 0.123ng/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬顆粒酶M(GZMM)ELISA試劑盒 porcine Granzyme M (GZMM) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 8.9 pg/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、單克隆抗體制備簡便性、**性及經濟性**評價。
豬抗神經節(jié)苷脂M1抗體(Anti-GM1)ELISA試劑盒 porcine Anti-Ganglioside M1 Antibody (Anti-GM1) ELISA Kit 3.125-200 U/L 1.3 U/L 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬抗繆勒管**(AMH)ELISA試劑盒 porcine Anti-Mullerian Hormone (AMH) ELISA Kit 0.156-10 ng/mL 0.041 ng/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP3β)ELISA試劑盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta (MIP3b) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 7.4 pg/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP3α)ELISA試劑盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha (MIP3a) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 4.9 pg/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA試劑盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta (MIP1b) ELISA Kit 31.25-2000 pg/mL 12.7 pg/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬睫狀神經營養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒 porcine Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) ELISA Kit 62.5-4000pg/mL 22.4pg/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬結合珠蛋白(Hpt)ELISA試劑盒 porcine Haptoglobin (Hpt) ELISA Kit 78.125-5000ng/mL 25.5ng/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
豬結締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒 porcine Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit 0.625-40ng/mL 0.242ng/mL 試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、**性及經濟性**評價。
